此外,PCR实验室要求严格分区,最好是负压实验室 。空气流动只会从外向内,那么实验室里的污染就不会扩散到外界,可以保证实验室外面的安全 。
与病毒“擦肩而过”或只有2毫米
拿到“身份证”的核酸样本并不能直接测试,而是要先提取核酸,对其进行扩增 。因此,核酸样本“奇幻漂流”的下一站,是PCR加样区——简单来说,检验人员要把病毒的遗传物质(核糖核酸)给“揪出来” 。
此时,检验人员戴着双层手套,在生物安全柜内一管一管地拧开螺旋盖,手工吸取样本,加入核酸提取板孔中,再拧上螺旋盖将标本放回原处 。“有多少份样本就有多少次的重复操作 。”吴文娟说 。那时,检验人员与新冠病毒“擦肩而过”的距离可能只隔着两层乳胶手套——也就是2毫米,但核酸检测工作不允许他们害怕 。

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检验人员正在进行核酸提取环节中的加样步骤
获得核酸后,检验人员用移液枪将核酸转移至事先准备好反应液的反应管里,制成反应体系,让它进入“奇幻漂流”的下一站:扩增分析区 。
“不能出错,不能有遗漏,不能发生生物安全事故 。可以说检验人员全身时刻处于高度紧张的状态 。就单说‘加样’,检验人员要用极小的枪头将每个提取好的核酸,大概是一滴水的四分之一加入到试剂中,每一步操作都必须十二分谨慎 。”吴文娟告诉记者,“我们迫切希望能有开盖、加样的仪器来‘解放’检验人员,可现有的仪器在速度上并不能令人满意,遇上大样本筛查只能靠手工操作 。”
让它变多才能检测出来
经历了复杂费时的前期制备过程,样本终于来到了“奇幻漂流”的关键一站 。样本的采样质量如何、核酸提取的质量如何、结果如何都将在此处见分晓 。
这里不得不提一下曾斩获诺贝尔奖的聚合酶链反应(PCR),这是20世纪80年代中期发展起来的一项体外核酸扩增技术,它可以将目标基因片段于数小时内扩增百万倍至数亿倍,成为当今生命科学研究最为重要且广泛使用的技术手段之一 。
怎么理解扩增?
如果把样本提取出来的核酸看作是一块土地,新冠病毒是种子,如何知道土地里有没有种子?简单的方法是,加点水和肥料(试剂),让种子一个变两个、两个变四个、四个变八个……“病毒是看不到的,而且微量样本也不容易检测到,所以要让它变多,才方便检测出来 。”吴文娟解释 。

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经过复杂的前期制备工作,才能在PCR仪上进行扩增检测 。上机后,就是历时约1.5小时扩增检测,而且中间不能有停顿、不能有断电、不能有仪器故障,核酸检测才能完成
当反应管在机器上开始检验后,也就意味着“开弓没有回头箭”——从采样到核酸制备任何一个环节出现问题都可能导致返工重测,从而使报告时间加倍 。
3月15日,国家卫健委发布《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第九版)》 。其中,《方案》将解除隔离管理和出院标准修改为“连续两次新型冠状病毒核酸检测N基因和ORF基因CT值均≥35(荧光定量PCR方法,界限值为40,采样时间至少间隔24小时)”,这也让很多“小白”知道,这儿的“CT”并非到医院拍个CT,而是指扩增的阈值 。“简单来说,CT值越低,说明阳性越强;CT值越高,说明阳性越弱 。”
作为初筛实验室,只能向疾控中心报告“疑似阳性” 。“我们会将CT值登记报告,上报相应区域的疾控部门 。随后根据疾控的要求转运原管标本以供复核 。”吴文娟说,而PCR实验室也会通过紫外线消毒 。据介绍,通常阴性样本会储存一两天以备查验 。
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