另一种情况是,它与尿蛋白的检测方法有关 。今天就来说明“重尿蛋白的检测方法” 。
前言目前尿蛋白的检测方法主要包括定性、定量、尿微量白蛋白测定和尿蛋白电泳分析四大类,具体如下 。
(一)尿蛋白定性检测
试纸法
这是基于指示蛋白误差原理,尿蛋白与试纸条中指示蛋白(如四溴酚蓝)结合引起的颜色反应,可通过与标准色的对比估算蛋白量 。自动化分析仪可以根据颜色深浅得到蛋白质定性结果,无外乎阴性(0.1g/l)、(0.1-0.2g/L)、) 0.2-0.2g) 6种结果
试纸条法对尿液中不同蛋白质的敏感性其实各不相同 。相比之下,对白蛋白最敏感,对球蛋白的敏感性相对较差 。例如多发性骨髓瘤患者(球蛋白高)尿液会出现大量游离轻链,但试纸法检测结果为“阴性” 。此类检测方法需要尿液新鲜,变质尿液PH值的变化会影响实验检测结果,尿液PH值升高会产生假阳性,需注意鉴别 。
磺基水杨酸法(磺基水杨酸法) )
该方法灵敏度为0.05-0.1g/L,其原理主要是带负电荷的磺酸与尿液中带正电荷的尿蛋白结合形成不溶性蛋白盐沉淀,根据浊度不同用加号表示 。
乙酸加热法
该方法灵敏度为0.15g/L,其原理是加热使蛋白质变性凝固,加酸使尿液氧化有利于蛋白质沉淀,溶解析出的碱类盐 。实际上是根据尿液的浑浊程度和沉淀量来判断结果(阴性- ) 。需要说明的是,在该方法中,如果加入过多的酸,则蛋白质微粒的获得电荷增加,可能呈现假阴性反应,因此在实验中加入1-2滴饱和氯化钠液和尿液后操作误差减少 。
)二)尿蛋白定量检测
缩二脲比色法
用磷钨酸乙醇溶液沉淀尿液中的蛋白质,在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫色络合物,与标准液比较颜色求出尿液中蛋白质的含量 。请小心 。本试验应准确记录24小时尿量,混尿后离心,蛋白浓度高时稀释标本后操作 。疑似药物干预,可用无水乙醇洗涤尿蛋白沉淀物3次后方可操作 。
丽春红s法
操作方法是在尿样中加入三氯乙酸和蓖麻毒素染料,形成尿蛋白染料复合物,离心沉淀,加入碱溶液溶解沉淀 。最后通过比色测定并计算蛋白质含量 。请注意,尿液中血红蛋白浓度高会影响结果 。离心后标本上清必须全部清除,沉淀过程中夹带脂褐素s会影响检测结果 。
考马斯亮蓝法
在酸性环境下,棕红色考文垂蓝与尿蛋白在疏水作用下结合,产生蓝色化合物,光谱吸收峰发生变化 。此时,可以与标准液比较测定尿蛋白量 。该方法灵敏度高,可测定尿蛋白浓度范围为0.01-1g/L,所需样品量少,但不同蛋白质差异较大 。请小心 。考马斯亮蓝溶液需要定期新鲜配置,过滤后即可使用 。
(三)尿微量白蛋白检测
尿总蛋白定量在正常范围内,尿白蛋白排泄率20-200ug/min或尿白蛋白量>; 达到30mg/d时,称为微量白蛋白尿 。它主要用于肾脏疾病的早期诊断,如糖尿病肾病、高血压肾病、隐匿性肾炎,由于尿液中微量白蛋白含量增加,多出现在尿蛋白定性阳性之前,本项目也是肾脏疾病早期诊断的指标之一 。操作方法可采用放射免疫测定、免疫比浊法、屈光法等方法检测 。
(四)尿蛋白电泳分析
由于尿蛋白的发生机制不同,尿蛋白的组成成分也不同,电泳技术可为临床提供有价值的诊断依据 。肾小球滤过屏障完整、尿蛋白含量极低时,电泳后染色的蛋白带信号极弱,以白蛋白带为主的肾小球滤过屏障异常,肾小管重吸收功能正常,滤过的小分子蛋白不超过肾小管重吸收阈值时,电泳后蛋白肾小管功能受损,过滤量过多,同时出现小分子量的蛋白质条带 。
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