作者：
陈荔闽 (山东省潍坊市人民医院)
刘湘源 (北京大学第三医院)
朱小春 (温州医科大学附属第一医院)
朱凤丽 (山东菏泽牡丹区妇幼保健院)
孙曙光 (辽宁省计划生育科学研究院)
冯晓芬 (广西国际壮医医院)

文章插图

1.封闭抗体是什么？
答：在正常孕妇的血清中，存在一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体(通常是IgG3，有与抗原结合能力，但没有或较低毒性)，它可抑制淋巴细胞反应，封闭母体淋巴细胞对胚胎滋养层的细胞毒作用，防止辅助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击 。封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子，故称其为封闭抗体 。
2.封闭抗体有哪些种类？临床上检测哪种封闭抗体更有意义？
答：目前发现的封闭抗体主要有以下几种：
(1)抗温B细胞抗体：为抗胎儿B淋巴细胞表面HLA-D/DR抗体;
(2)抗冷B细胞抗体：为非HLA冷B抗体;
(3)抗特异性抗体：对母体辅助T细胞表面HLA-D/DR受体的抗体;
(4)抗TLX (滋养细胞及淋巴细胞交叉反应抗原)抗体：是对绒毛及淋巴细胞共同抗原的抗体，可封闭混合淋巴细胞反应;
(5)抗Fc受体的抗体：为封闭丈夫B淋巴细胞上Fc受体的抗体;
(6)抗父体的补体依赖性抗体(APCA) 。哪种封闭抗体更有临床意义尚无研究报道，临床上比较常用的是测抗丈夫淋巴细胞抗体和抗HLA-DR抗体 。
3.封闭抗体是如何产生的呢？
答：机体可通过妊娠(胎儿滋养细胞脱落，进入母亲血液循环)、输血、器官移植和细菌感染所致交叉致敏等方式刺激母体产生封闭抗体 。
4.如何检测封闭抗体？
答：目前检测封闭抗体的方法有单向混合淋巴细胞反应封闭试验、EA 玫瑰花环抑制试验( EAI) 、补体依赖的细胞毒性试验(CDC)、酶联免疫测定法(ELISA)及流式细胞术分析法等，由于补体依赖的细胞毒性试验法和酶联免疫测定法不需要特殊的仪器设备，且操作简单快速，因此被广泛应用于封闭抗体的检测 。目前多数医院采用流式细胞术测定母亲抗父亲CD3、CD4、CD8、CD25的抗体，混合淋巴细胞培养及抑制试验，封闭抗体抗独特型抗体
5.用补体依赖的细胞毒性试验检测封闭抗体的优缺点？
答： (1)用丈夫活体淋巴细胞与产妇血清共同孵育，再加补体和染料，观察死亡细胞数及毒性指数，可反映患者体内补体依赖型封闭抗体的总体水平，以细胞毒性指数>20%为阳性，见图1 。
(2)优点：直接检测封闭效应，同时测出抗IgM 和 IgG型父体的补体依赖性抗体水平；
(3)缺点：操作繁琐，要求新鲜标本，假阳性和假阴性率高，检出阳性率较低(低于酶联免疫法)，仅测定HLA-Ⅰ类抗体 。该方法基本被淘汰 。

文章插图
图1 补体依赖的细胞毒性试验检测封闭抗体
6.用酶联免疫测定法检测封闭抗体的优缺点？
答： (1)将HLA抗原包被在一个孔内，将母亲血清加入孔中与孔内的HLA抗原反应，通过酶作用使其显色，见图2 。(2)优点：灵敏度较高，检测的是HLA-Ⅰ和Ⅱ类抗体，操作简便，结果易读，成本低，适合于大样本检测；(3)缺点：结果不太准确，假阳性和假阴性率高 。间接检测封闭效应，强阳性可间接反映有较高水平的抗独特型抗体 。检测的是IgG型抗体(不包括IgM 型)，包括无反应的抗体和丈夫淋巴细胞主动免疫治疗前可能存在的IgG抗体 。

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